Molecular Probes™ BODIPY™ FL-C₅ NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Beschreibung

BODIPY™ FL-C₅ ist ein leuchtend grün fluoreszierender Farbstoff mit ähnlicher Anregung und Emission wie die Farbstoffe Fluorescein (FITC) oder Alexa Fluor™ 488. Es hat einen hohen Extinktionskoeffizienten und eine hohe Fluoreszenzquantenausbeute und ist relativ unempfindlich gegenüber Polarität und pH-Schwankungen von Lösungsmitteln. Im Gegensatz zu den hochgradig wasserlöslichen Fluorophoren Alexa Fluor™ 488 und Fluorescein (FITC) besitzen BODIPY™ Farbstoffe einzigartige hydrophobe Eigenschaften, die sich ideal zum Färben von Lipiden, Membranen und anderen lipophilen Verbindungen eignen. Der BODIPY™ FL-C₅ Farbstoff hat im erregten Zustand eine relativ lange Lebensdauer (normalerweise 5 Nanosekunden oder länger), was für polarisationsbasierte Fluoreszenzassays und einen großen Zweiphotonenquerschnitt für die Multiphotonenerregung nützlich ist. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir den BODIPY™ FL-C₅ Farbstoff konjugiert an eine Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Tracersubstanzen und Amplifikationssubstraten an, die für die Markierung und Detektion von Zellen optimiert wurden (Weitere Informationen).

Der NHS-Ester (oder Succinimidylester) von BODIPY™ FL-C₅ ist die am häufigsten verwendete Substanz zum Konjugieren des Farbstoffs an ein Protein oder einen Antikörper. NHS-Ester können zur Markierung der primären Amine (R-NH₂) von Proteinen, aminmodifizierten Oligonukleotiden und weiteren aminhaltigen Molekülen verwendet werden. Die daraus resultierenden BODIPY™ FL-C₅ Konjugate weisen helle Fluoreszenz, schmale Emissionsbandbreiten und eine relativ lange Lebensdauer des erregten Zustands auf, was für Fluoreszenzpolarisierungsassays und Zweiphotonenerregungsmikroskopie (TPE) nützlich sein kann.

Dieser reaktive Farbstoff enthält einen C₅-Alkyl-Spacer zwischen dem Fluorophor und der NHS-Estergruppe. Dieser Spacer hilft, den Fluorophor von seinem Anhaftungspunkt zu trennen und so die Interaktion des Fluorophors mit dem Biomolekül, an das er konjugiert ist, zu reduzieren.

Ausführliche Informationen zu diesem BODIPY™ FL-C₅ NHS-Ester:

Fluorophor-Markierung: BODIPY™ FL-C₅ Farbstoff
Reaktive Gruppe: NHS-Ester (Succinimidylester)
Reaktivität: Primäre Amine auf Proteinen und Liganden, aminmodifizierte Oligonukleotide
Anregungs-/Emissionsmaxima (Ex/Em) des Konjugats: 504/511 nm
Extinktionskoeffizient: 87.000 cm-1M-2
Molekülmasse: 417,22

Typische Konjugationsreaktion
Aminreaktive Farbstoffe können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden (das mitgelieferte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert). Die Reaktion ist auf beliebige Proteinmengen skalierbar, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden unter Verwendung von drei unterschiedlichen molaren Verhältnissen von reaktivem Reagenz zu Protein.

Der BODIPY™ NHS-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) aufgelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1 bis 0,2 M Natriumbikarbonat-Puffer, pH-Wert 8,3, bei Raumtemperatur 1 Stunde lang. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysins, erreichen Sie eine bessere selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugataufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem BODIPY™ Farbstoff durch Einsatz einer Gelfiltrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder Ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Reinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 bis 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 bis 50 μg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 bis 100 μg (A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Antikörper- und Proteinmarkierungskits, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Experimentanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörpermarkierungskits oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Weitere Informationen zu unseren Markierungskits finden Sie unter Protein- und Nukleinsäuremarkierungskits—Kapitel 1.2 im Molecular Probes™-Handbuch.

Bestellen’ Sie ein individuelles Konjugat
Sollten Sie in unserem Bestandsverzeichnis ’nicht das Passende finden’, erstellen wir’ Ihnen gern ein Antikörperkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser individualisierter Konjugationsservice arbeitet effizient und absolut vertraulich, und wir verbürgen uns für höchste Qualität. Wir sind nach ISO 9001:2000 zertifiziert.