Thermo Scientific™ BplI (5 U/μL)

Beschreibung

Herkömmliche Restriktionsendonukleasen sind eine große Ansammlung hochwertiger Restriktionsenzyme, die für den Einsatz in einem der Puffer des Fünf-Puffer-Systems optimiert sind. Darüber hinaus bietet der universelle Tango Puffer Vorteile bei Doppelverdauungen. Alle Enzyme zeigen unter den empfohlenen Puffer- und Reaktionsbedingungen 100 % Aktivität. Um eine konsistente Enzymleistung zu gewährleisten, enthalten Thermo Scientific Restriktionsenzym-Puffer vorgemischtes BSA, welches die Stabilität zahlreicher Enzyme verbessert und Schadstoffe bindet, die in DNA-Proben enthalten sein können.

5'...▵ ₈(N) G A G (N)₅ C T C (N)₁₃▵...3'

3'...▵₁₃(N) C T C (N)₅ G A G (N)₈ ▵...5'

Bedingungen für 100 % Aktivität:

• [1x Buffer Tango™]+ SAM:[33 mM Tris-Acetat (pH 7,9 bei 37°C), 10 mM Mg-Acetat, 66 mM K-Acetat und 0,1 mg/ml BSA]+ 0,05 mM S-Adenosylmethionin
• Bei 37°C inkubieren

Lagerungspuffer:

• BplI wird geliefert in:10 mM Tris-HCl (pH 7,4 bei 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA und 50 % (v/v) Glycerin

Ligation und erneutes Schneiden:

• Nach 10-fachem Verdau mit BplI können über 70 % der DNA-Fragmente ligiert werden, aber keines davon kann aufgrund der Methylierung der Erkennungssequenz durch dieses Enzym erneut geschnitten werden

Methylierungseffekte:

• Dam: keine Überlappung — keine Auswirkung
• Dcm: keine Überlappung — keine Auswirkung
• CpG: möglicherweise Überlappung — keine Auswirkung
• EcoKI: keine Überlappung — keine Auswirkung
• EcoBI: keine Überlappung — keine Auswirkung

Verdauung von Agarose-eingebetteter DNA:

• Es sind mindestens 10 Units der Enzyme für den vollständigen Verdau von 1 μg in Agarose eingebetteter Lambda-DNA in 16 Stunden erforderlich

Hinweis:

BplI benötigt für seine Aktivität nur Mg²+, wird aber von S-Adenosylmethionin angeregt. 0,05 mM S-Adenosylmethionin führt zu einer mehr als 100-fachen Zunahme der BplI-Aktivität. Dennoch ist die vollständige Spaltung einiger Substrate mit BplI schwer zu erreichen. Die BplI-Konzentration wird bei der höchsten Spaltungswirkung ermittelt, wenn eine weitere Zugabe von Enzym das Fragmentierungsmuster nicht weiter ändert.