Thermo Scientific™ Terminale Desoxynukleotidyltransferase (20 U/μl)

Beschreibung

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) ist eine matrizenunabhängige DNA-Polymerase, die wiederholt Desoxyribonukleotide an das 3'-OH-Ende von Oligodesoxyribonukleotiden sowie von einzel- und doppelsträngiger DNA anhängt. Der von TdT benötigte Primer ist ein Oligonukleotid mit mindestens drei Nukleotiden. TdT weist mit RNA als Template eine variable Leistung auf, die stark von der tertiären Struktur der 3'-Enden der Akzeptor-RNA und der Art der Nukleotiden abhängt. Im Allgemeinen ist die Leistung geringer als beim Verwenden von DNA als Template.

• Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Markierung mit Fluorescein, Biotin oder Aminoallyl) Quelle: E.-coli-Zellen mit einem geklonten Gen, das terminale Desoxynukleotidyl-Transferase 1 von Kalbsthymus codiert

• Die Abwesenheit von Endo-, Exodesoxyribonukleasen Phosphatasen und Ribonukleasen wurde durch geeignete Qualitätstests bestätigt.

Quelle:

• E. coli-Zellen mit einem geklonten Gen, das terminale Desoxynukleotidyl-Transferase aus Kalbsthymus codiert

• Eine Enzymeinheit katalysiert den Einbau von 1 nmol Desoxyribonukleotiden in eine Polynukleotidkette (adsorbiert an DE-81) in 60 Min. bei 37°C.
• Die Enzymaktivität wird in folgender Mischung gemessen:
• 200 mM Kaliumkacodylat (pH 7,2), 1 mM CoCl₂, 0,01 % (v/v) Triton X-100, 10 μM Oligo(dT)₁₀, 1 mM dTTP und 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP
Lagerungspuffer:
• Das Enzym wird geliefert in:100 mM Kaliumacetat (pH 6,8), 2 mM 2-Mercaptoethanol, 0,01 % (v/v) Triton X-100 und 50 % (v/v) Glycerin

5X Reaktionspuffer:

• 1 M Kaliumkacodylat, 125 mM Tris, 0,05 % (v/v) Triton X-100, 5 mM CoCl₂ (pH 7,2 bei 25°C)

Hemmung und Inaktivierung:

• Hemmstoffe: Metallchelatoren, Ammonium, Chlorid, Jodid, Phosphationen
• Inaktivierung durch 10-minütiges Erhitzen auf 70°C oder durch Hinzufügen von EDTA

Empfohlen für:

Erzeugung synthetischer Homo- und Heteropolymere (1); Homopolymeres Tailing linearer doppelsträngiger DNA mit jeglichen 3‘-OH-Enden (2, 3); Oligodesoxyribonukleotide und DNA-Markierung (2, 4-8); 5‘-RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) (9); In-situ-Lokalisation von Apopotose (10)

Hinweis:

Durch die Verwendung von CoCl₂ ist der TdT-Reaktionspuffer nicht für nachfolgende Anwendungen geeignet. Das CoCl₂ muss aus dem Reaktionsgemisch über eine Zentrifugationssäule oder Phenol- bzw. Chloroformextraktion und anschließender Ethanolausfällung entfernt werden.